尊龙凯时推出的间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒是一款经过团队精心优化的科研产品，旨在增强间充质干细胞向成骨细胞的分化能力。该试剂盒仅供科研用途，不得用于诊断、治疗、临床、家庭等其他用途。

产品组成与存储条件

本产品含有以下成分，详细信息如下：

• 诱导分化添加剂：5mL/10mL（-20℃，有效期1年）
• 优质胎牛血清：10mL/20mL（-20℃，有效期1年）
• 细胞基础培养基：85mL/170mL（4℃，有效期1年）
• 茜素红染色液：5mL/10mL（室温，有效期1年）

注意事项：1. 为确保产品的有效性，请避免反复冻融。2. 配制好的诱导培养基需存放于2-8℃，有效期为两周，请根据实验用量合理配制。

使用说明

1. **完全培养基的配制** - 在室温条件下融化添加剂及血清。请注意，若添加剂或血清中出现沉淀属正常现象，无需过滤以避免成分损失。 - 在无菌操作台上根据实验需求配制完全培养基，建议每次配制50mL，先加入细胞基础培养基和胎牛血清，再加入诱导分化添加剂。配制比例见下表：

试剂成分	配制比例
诱导分化添加剂	5% (25mL)
优质胎牛血清	10% (5mL)
细胞基础培养基	85% (42.5mL)

2. **实验步骤** - **细胞培养瓶/板包被** 向细胞培养器皿中加入0.1%明胶溶液，轻轻晃动以完全覆盖底面，放置于37℃培养箱中孵育30分钟，吸去多余液体即可。 - **细胞准备** 建议使用第3~5代、纯度达到90%以上、状态良好的间充质干细胞，通过含10% FBS的完全培养基调整细胞浓度，并均匀铺于包被好的培养瓶/板中，置于37℃，5% CO2，饱和湿度的培养箱中培养。具体接种详情见下表：

培养器皿底面积	细胞量	培养液体积
24孔培养板	2×105 cell/孔	1mL/孔
12孔培养板	4.5×105 cell/孔	2mL/孔
T25培养瓶	25×105 cell	5mL

3. 待细胞汇合度达到约90%时，即可进行诱导分化。请小心吸弃培养上清，沿孔壁缓慢加入先前配制好的诱导分化完全培养基，置于37℃恒温培养箱中培养。注意，培养基需在加入细胞前提前预热至37℃。4. 每2~3天更换新鲜的诱导分化完全培养基，若细胞培养上清颜色变为澄清的黄色，说明营养消耗较快，请及时缩短换液周期。5. 在诱导2~4周后进行茜素红染色鉴定，请在显微镜下确认钙结节形成后再进行染色。

茜素红染色分析

1. 诱导分化结束后，小心吸弃培养上清，使用1×PBS润洗1~2次，室温下固定30分钟。2. 吸弃固定液，沿孔壁缓慢加入茜素红染色液，染色液体积请参考相关表格，室温下染色30分钟。3. 吸出染色液，使用1×PBS润洗去浮色，在显微镜下观察细胞染色效果，钙盐呈深橙红色。

质量控制

- 进行无菌检测（包括细菌、真菌和支原体检测）- pH测试- 渗透压检测- 内毒素检测

注意事项

本试剂盒仅限科研用途，培养体系中某些组分可能对人体健康有害，请避免直接接触。若不慎接触，及时用自来水冲洗即可。选择尊龙凯时的产品，确保您的实验高效且安全。